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玻璃恒温水浴权威发布_电影《玻璃室的秘密》(2024年11月精准访谈)

内容来源：零配件导航所属栏目：观点更新日期：2024-11-27

玻璃恒温水浴

细胞冻存复苏，活力持久秘诀！ ### 背景知识 𐟌𑊊在细胞培养的过程中，传代和日常维护需要大量的时间和资源。细胞一旦离开活体环境，其生物特性会逐渐发生变化，随着传代次数的增加和体外环境的变化，这些变化会越来越显著。因此，及时进行细胞冻存是非常必要的。细胞在-70℃冰箱中可以保存一年之久，而在液氮中（-196℃）理论上可以无限期保存。原理 𐟔슊细胞冻存和复苏的基本原则是“慢冻快融”。实验证明，这种方法可以最大限度地保存细胞的活力。目前，细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜（DMSO）作为保护剂。这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻，可以使细胞内的水分渗出细胞外，减少冰晶的形成，从而减少冰晶对细胞的损伤。复苏细胞时，应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。操作步骤 𐟓‹ 材料准备 𐟛 ️ 仪器净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱（4℃、-20℃、-70℃）倒置相差显微镜培养箱液氮冰箱玻璃器皿吸管（弯头、直头）培养瓶玻璃瓶（250ml、100ml）废液缸塑料器皿吸头枪头胶塞移液管（10ml） 15ml离心管冻存管（1～2ml）其他物品微量加样枪红血球计数板记号笔医用橡皮膏移液枪试剂 D-Hanks液小牛血清培养液双抗（青霉素、链霉素）胰蛋白酶（0.08%） 1NHCl 7.4%NaHCO3 DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油操作步骤 𐟓 冻存细胞：用D-Hanks液清洗细胞，去除培养基。加入胰蛋白酶消化细胞，使其完全脱离培养瓶。将消化后的细胞转移至离心管中，离心后弃去上清液。加入含有DMSO或甘油的保护剂，轻轻吹打均匀。将细胞悬液分装至冻存管中，标记后放入程序降温盒中。将程序降温盒放入-70℃冰箱中，逐步降温至-196℃后转移至液氮罐中。复苏细胞：从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中快速融化。将融化后的细胞悬液转移至离心管中，离心后弃去上清液。加入适量D-Hanks液重悬细胞，进行细胞计数和活力检测。将细胞转移至培养瓶中，加入新鲜培养基进行培养。注意事项 ⚠️ 所有操作需在无菌条件下进行，确保实验安全。冻存过程中要注意缓慢降温，避免冰晶形成。复苏过程中要快速融化，减少胞内再结晶的形成。

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