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电动匀浆器前沿信息_全自动小型加工机器(2024年12月实时热点)

内容来源：零配件导航所属栏目：教程更新日期：2024-11-29

电动匀浆器

WB实验全攻略：从样品处理到结果解读 𐟧ꠥꌦ�ꤊ处理样品前的准备将培养皿或培养瓶放在冰上，用冰冷的PBS缓冲液洗涤细胞。吸干PBS，然后添加适量的冰冷细胞裂解缓冲液（每107细胞/100 mm培养皿/150 cm2培养瓶加入1 ml；每5㗱06细胞/60 mm培养皿/75 cm2培养瓶加入0.5 ml）。用预冷的塑料细胞刮板刮下贴壁细胞，将悬浮细胞液轻柔地转移至预冷微量离心管中。在4℃下持续搅拌30分钟。随后进行超声处理。以探头超声仪为例，设定功率为40W或总功率的40%，进行多次打3秒停3秒的超声处理，每次超声5-10次。超声后，裂解液将变得清澈且不再黏稠。加入Loading缓冲液后进行煮样。注意：跨膜蛋白不宜煮样，直接加入Loading缓冲液；（若使用水浴超声，则适当延长时间，超声30秒至2分钟，全程保持在冰浴环境中）。若无超声仪，可使用带注射器的针头（20G-18G-16G）在冰上多次抽吸，直至裂解液变清澈。解剖样品前的准备使用干净的器械在冰上解剖目标组织。为防止蛋白酶的降解，最好在尽快完成解剖过程。将解剖好的组织放入圆底离心管或Eppendorf管中，立即浸入液氮中进行“速冻”。将样本存储在-80Ⰳ中备用，或者立即放在冰上进行匀浆处理。对于约5 mg的组织，迅速向管中加入约300 裂解液，并使用电动匀浆器匀浆。使用2倍裂解液两次冲洗刀片，每次使用200 ，然后在4℃下（例如将回旋振荡器放入冰箱中）持续振摇2小时。裂解液的体积应根据组织总量来确定；蛋白提取物不宜过于稀释，以免造成蛋白丢失，同时尽量减少样本体积，以便于在凝胶上进行上样。最小浓度为0.1 mg/mL，最佳浓度为1-5 mg/mL。在微型离心机中以4℃和12,000 rpm的速度离心20分钟。轻轻地从离心机中取出离心管放置在冰上。将上清液吸出并转移到新的预冷离心管中，将沉淀废弃。 𐟓 实验注意事项在进行WB实验时，每个步骤都需要仔细操作，以确保实验结果的准确性。希望这篇详细的实验方案能帮助你更好地理解和执行WB实验。

鋨銥溶液如何分离提取 𐟌Ÿ Trizol法提取RNA的原理 Trizol是一种单相溶液，由苯酚和异硫氰酸胍等组成。它能破坏细胞并溶解细胞成分。通过加入氯仿，可以萃取出上层水相（含RNA）、界面层和下层的红色有机相（含DNA和蛋白）。 𐟔젥ꌦ�ꤊ样品处理组织：将组织在液氮中研磨，每50-100mg组织中加入1mlTrizol，用匀浆仪进行匀浆处理，样品体积不应超过Trizol体积的10%。单层培养细胞：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每10cmⲩ⧧ﯼˆ即3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液枪吹打几次。裂解细胞对于贴壁细胞：吸弃培养基，用1mlPBS洗2次（PBS要避免37℃水浴，不能用冷的PBS）。在6孔板中放冰上，每孔加入1mlTrizol，裂解细胞，吹打混匀至透明。收集裂解液将裂解液收集到1.5mlEP管中，裂解5-10min。此时可存于-80℃中。每个样品中加入200ul氯仿，剧烈震荡15s，室温3min。 12000rpm离心15min。沉淀RNA 在新的EP管中加入500ul异丙醇，1:1吸取等体积的上层RNA水相溶液，同一方向混匀，室温下静止10-20min。注意不要吸到下面中间层。 12000rpm，4℃离心10min。弃除异丙醇，留下沉淀。洗涤RNA 加入1ml75%乙醇，12000rpm，4℃离心3min，弃上清液。重复上一步，室温干燥5min（RNA晾干，留一点点就可以了）。溶解RNA 加入30-50ulDEPC水溶解，用NanoDrop2000测纯度（1.8-2.1正常）。分装，于-80℃冻存。 𐟧𜠦𓨦„事项过程中需佩戴口罩和新手套，对台面以及周围环境进行灭酶处理，尽量在超净台中进行操作。使用无Rnase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。溶液配制应使用无Rnase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度为0.1%（V/V），放置过夜，高压灭菌）。 Trizol裂解液非常危险，需小心避免溅到身上，台面上的Trizol要及时清理干净。 𐟒ᠥ𘸨灩—˜ RNA得率过低：使用更有效的破碎/匀浆方法，如液氮捣碎、酶消化破壁、电动匀浆器匀浆；更换抽提试剂；核酸浓度低时，采用低温沉淀，并延长沉淀时间；增加细胞数量。 RNA质量不高：取上层水相时求多，吸到了下层有机相；清洗不干净。

circRNA实验全解 𐟔 实验原理在组织或细胞中提取的total RNA通常包含多种RNA。为了准确分析circRNA，首先需要去除样本中的核糖体RNA和poly-A RNA干扰，然后用RNase酶消化掉线性RNA，从而使circRNA富集。 𐟓Š 实验目的从总RNA中富集circRNA，采用Northern blot和特异的PCR进行验证，并对circRNA的成环特性进行评估。 𐟧ꠥꌦ料 RNA提取试剂盒核糖体RNA去除试剂盒 PolyA结合磁珠 RNAaseR试剂盒放线菌素D Northern blot试剂盒发散引物RT-PCR 𐟓 实验步骤 4.1 RNA提取样品处理组织样品：加入400ul Trizol溶液到装有绿豆大小组织块的EP管中，利用电动组织匀浆器在冰上充分匀浆1-2min，后放置室温充分裂解10min。细胞样品：12孔板细胞弃去上清，每孔加入600ul Trizol溶液。先在冰上裂解15-20min，再用1ml移液枪吹打液体充分裂解贴壁细胞，后将液体转移到RNasefree EP管中。 RNA提取按1:5比例，在Trizol溶液中加入氯仿，手动充分摇匀混合液20-30s，室温放置10min。 4度1200g离心10min，小心转移上层透明液体到EP管中。按异丙醇与Trizol溶液比例为1:2加入异丙醇，上下颠倒混匀液体，室温放置10-15min。 4度1200g离心10min，弃去上清，可见羽毛状RNA沉淀于管侧底部。按等比例加入75%乙醇，温和地悬浮RNA沉淀。 4度7500g离心5min，尽量吸除上清，室温晾干5-10min。用20ul RNase free dH20溶解RNA，测浓度后-80度保存。总RNA定量 RNA在260nm波长处有最大吸收峰，可通过测定RNA样品的OD260和OD280估算出RNA的含量和纯度。OD260值为1相当于40ug/ml单链RNA，该方法提取的RNA OD260/280值在0.8-2之间。 circRNA的预处理去除核糖体RNA和poly-A RNA 使用Invitrogen的核糖体RNA去除试剂盒RiboMinusTM Human/Mouse Transcriptome Isolation Kit（货号K1550-01）。通过磁珠法结合Poly(A)的RNA后剩余的RNA即为Poly(A)-RNA样品。 RNAaseR酶消化 RNase R是一类核糖核酸外切酶，能降解大部分线性RNA，但circRNA不易被RNase R酶消化降解。因此可以通过该实验鉴别circRNA和线性RNA。准备总RNA样品：提取细胞或组织的总RNA，测浓度后备用。 RNaseR反应体系：取5ug total RNA样品按下面体系准备消化。短暂旋转试管，添加5xFirst-StrandBuffer, 0.1MDTT, RNasin和SuperScriptM RT，轻轻移液并将反应液在25℃下孵育5分钟。在50℃下孵育60分钟，然后通过灭活反应在70℃加热15分钟。发散引物可以扩增circRNA，而不能扩增线性RNA。 𐟓š 参考文献 Chen et al. (2015). Isolation of non-polyadenylated and ribosomal-free RNAs from mammalian cells. Methods Mol Biol 1206, 69-80. Yang et al. (2016). Characterization of Circular RNA. Methods Mol Biol 1402, 215-227.

铁死亡研究：铁离子浓度测定全攻略 𐟌Ÿ 样品准备首先，用离心管精确称重并去皮，然后加入组织块再次称重。每50mg组织加入400⵬裂解液。接着，用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器将组织破碎。匀浆后，将其置于摇床上裂解2小时，然后以12000rpm离心5分钟，取上层清液备用（记得留一份BCA测蛋白浓度校正哦～）。 𐟓 标准品稀释在每个离心管中加入110uL稀释用液（后面要用100uL，所以多配一点点备用）。然后，从3mM母液中吸取12.2uL至300uM的离心管中，混匀后吸出110uL至75uM的管内，依此类推，配置成150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM的标准品。 𐟔砦𗷦𖲁配置将缓冲液与4.5%的高锰酸钾溶液（0.225g高锰酸钾加入5ml纯水）按1:1混匀。 𐟧ꠥ𗥤𝜦𖲩…置使用1.5ml离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。 𐟕𐯸 工作液孵育将工作液混匀，60℃孵育1小时。冷却至室温后离心，将管盖与管壁上的液滴沉入管底。 𐟔젩“离子检测加入30ul铁离子检测剂混匀，室温孵育30分钟。此步可能产生络合物沉淀，用移液器轻轻吹打即可溶解，若沉淀不溶，12000rpm离心5分钟，取上层清液即可。 𐟓Š 检测取200ul于96孔板，在550nm测定吸光度（如果不能测定550nm，也可以在540nm~580nm范围内检测）。 𐟓ˆ 绘制标准曲线并计算铁离子浓度最后，绘制标准曲线并计算铁离子浓度。记得用BCA校正浓度哦～ ⚠️ 注意事项操作时尽量避免铁器的接触，所以我把塑料吸头套在了镊子上来取组织啦～

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