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细胞冻存小技巧,轻松保存你的宝贝细胞! 细胞在正常的生长过程中会不断代谢,这个过程需要各种蛋白酶的参与。当温度降到-70℃以下时,蛋白酶就会停止工作,细胞也会进入休眠状态,这样我们就可以把它们长期保存起来啦!下面就给大家分享一些细胞冻存的实用小技巧,赶紧收藏吧! 实验材料准备 ꊥ培养基 血清(常规为FBS/NBS) 超净工作台 无菌二甲基亚砜 无菌PBS磷酸盐缓冲液 移液枪 电动移液枪 相关耗材准备 슐ET/PETG方形试剂瓶 15mL、50mL无菌离心管 盒装无菌吸头 血清移液管 杯式滤器(0.22 PES膜) 针式滤器(0.22 PES膜) 冻存管 自动旋盖机 程序降温盒 实验准备 ꊥ液准备:对于一般的细胞,我们可以按照55%基础培养基 + 40%牛血清(FBS/NBS) + 5%DMSO的比例来配置。如果是非常重要的细胞,建议使用90%牛血清(FBS/NBS) + 10%DMSO。配置完成后,可以分装到15mL离心管中,4℃条件下储存备用。如果配置量较大,也可以分装到50mL离心管中,-20℃条件下冷冻储存。注意,如果牛血清内有析出沉淀物,可以用0.22滤膜过滤除菌,使用前37℃水浴加热。 待冻存细胞准备:在冻存前,选择细胞生长状态良好且处于对数生长期的细胞。冻存前12~24小时换新鲜培养基维持细胞状态。 实验流程 슨炥细胞密度,约为80%~90%。用移液枪吸出陈旧培养基,加入无菌PBS清洗细胞1-2次,去除培养环境中的残留培养基。 加入适量对应胰酶或消化液,使胰酶没过细胞,放入培养箱消化。显微镜下观察细胞状态,胞质回缩,细胞间不再连接成片时,加入完终止液终止消化。 用吸头轻轻吹打细胞,形成细胞悬液,将细胞悬液1000rpm离心3-5分钟。丢弃上清,加入适量预先配制好的冻存液,轻轻吹打使细胞均匀并计数。用冻存液调节的细胞密度,使之终密度为5x106/ml~1x107/ml。 用移液枪按照预计容量,分装入细胞冻存管中,采用自动旋盖机旋盖密封。 标准的冻存程序为降温速率处-1℃~-2℃/min。可以将待冻存细胞按照以下步骤逐步冻存:室温→4℃(20分钟)→-20℃(30分钟)→-80℃(过夜)→液氮长期保存。 小贴士 እ前一定要选择状态良好的细胞哦! 冻存液配置时要注意比例和浓度。 分装时尽量均匀分配到各个冻存管中。 冻存过程中要严格控制降温速率,避免影响细胞活性。 希望这些小技巧能帮到你,让你的细胞宝宝们安全度过寒冬!如果有任何问题,欢迎留言讨论哦!
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