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电泳槽玻璃前沿信息_电泳漆哪个厂家最好(2024年12月实时热点)

内容来源：零配件导航所属栏目：教程更新日期：2024-12-01

电泳槽玻璃

WB实验全攻略：从零开始到成功曝光在WB实验领域摸爬滚打了四年，我积累了不少心得。从细胞培养的第一步到最后的化学发光成像，每一个细节都至关重要。两天的辛勤工作，往往在曝光的瞬间决定成败。下面是我总结的一些关键步骤，希望能帮到你们。电转：关键的一步 𐟔犦🀦𔻐VDF膜：PVDF膜需要在甲醇和4度中激活30分钟。电泳后处理：电泳结束后，取出胶板，短玻璃板朝上放置。揭开短玻璃板后切除多余的胶，在水中将胶从长玻璃板上取下。转膜：在电转液中，转膜夹黑色面朝下，依次放置石棉网-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-石棉网，夹紧转膜夹，注意PVDF膜要与胶贴合，排走气泡。调整转膜夹黑色界面转向转膜槽负极，白色面朝向转膜槽正极。灌满电转液后，用200mA恒定电流转膜120分钟（具体条件自行探索），转膜槽外周装满冰块。封闭：去除背景的关键 𐟐„ 转移膜：将膜取出后，应观察到marker完全从胶转移至膜上。清洗：用TBST快速清洗掉膜上残留的电转液。封闭：将PVDF膜浸泡在5%封闭牛奶中，缓慢摇荡，室温孵育1小时。抗体孵育和化学发光成像：让蛋白可视化 𐟌Ÿ 一抗孵育：封闭结束后，用1㗔BST缓冲液洗掉多余的牛奶，洗膜每次5分钟，共3次。一抗使用一抗稀释液或TBST按照1：5000稀释（具体条件自行摸索），然后将膜浸泡在一抗中，于4℃冰箱中摇床孵育过夜。二抗孵育：一抗孵育后并回收，加入1㗔BST缓冲液放置于摇床上快摇5分钟，共3次。使用5%脱脂牛奶按照1:1000稀释二抗，室温慢摇1小时。化学发光成像：二抗孵育完毕后，回收二抗，1㗔BST快洗5分钟，共3次。洗膜结束后，将发光液敷在膜上，通过化学发光成像仪曝光，采集并使用ImageJ分析灰度。希望这些步骤能帮到你们，祝大家实验顺利！𐟒ꀀ

WB实验全攻略：从电泳到曝光 𐟓– SDS-PAGE 电泳上样：首先，用斜插板固定玻璃板，确保底部对齐，避免漏胶。将分离胶灌到适当的高度，可以用梳子测试一下，梳子齿距离分离胶上液面大约7mm为宜。然后用异丙醇或蒸馏水封胶，静置30分钟。接着，将浓缩胶缓慢均匀地加入到分离胶上层，直至加满，加上梳子，20分钟后待分离胶凝固。向电泳槽中加入电泳缓冲液，使两块玻璃内侧电泳液高于上样孔，外侧电泳槽内电泳液浸没凝胶底部，玻璃板内侧液面高于外侧。然后开始上样，每孔总上样量在20 以内，上样时间要短，避免样品扩散。 𐟔„ 转膜转膜的摆放顺序为：阴极碳板+海绵+三层滤纸+胶+膜+三层滤纸+海绵+阳极碳板。将电泳完毕的凝胶放入转膜缓冲液中，采用“三明治”模式，打开电转印夹，每侧垫上一块专用的转膜液浸透过的海绵垫，再各放一块滤纸，凝胶平稳地放在阴极滤纸上。然后将已经用甲醇激活过的PVDF膜放在凝胶的上方，去除气泡，夹好夹子，将转印夹放入转印槽中。 𐟧ꠥ𐁩—�Ž抗体孵育将转印完的膜放入装有 PBST 的孵育槽中，快速漂洗一次，然后加上脱脂牛奶，放置脱色摇床上，室温下封闭 60 分钟。按照抗体说明书，进行一抗稀释，配置好后，倒掉孵育槽中的封闭液，加入配置好的一抗，4℃孵育摇床过夜（摇床慢摇）。回收一抗，用 PBST 快速洗膜三次，然后加入 PBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次 10 分钟，洗三次。将二抗用 PBST 按照 1:5000 的比例进行稀释，然后加入孵育槽中，放置摇床上慢摇，室温下孵育60分钟。PBST 快速洗膜三次，然后再加入 PBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次 10 分钟，洗三次。 𐟓𘠦›光根据条带深浅调整曝光时间。 𐟓‹ 实验参数制胶体系：分离胶A液2.5 mL+分离胶B液2.5 mL；浓缩胶A液1 mL+浓缩胶B液1 mL；50  AP 电泳配方：SDS 1g+Glycine 18.77g+Tris 3.03g+纯水1000 mL 转膜配方：Glycine 14.42g+Tris 3.03g+甲醇 150mL+纯水 850mL 电泳条件：上层胶（浓缩胶）30分钟，下层胶（分离胶）1小时转膜条件：30分钟（快速转膜液）封闭时间：1小时封闭后洗膜时间：10分钟㗳一抗浓度：说明书一抗后洗膜时间：10分钟㗳二抗浓度：说明书二抗后洗膜时间：10分钟㗳

WB实验全攻略：从电泳到曝光 ### SDS-PAGE 电泳 𐟌Š 上样准备：首先，用斜插板固定玻璃板，确保底部对齐，避免漏胶。然后，将分离胶灌到适当的高度，可以用梳子测试一下，梳子齿距离分离胶上液面大约7mm为宜。接着，用异丙醇或蒸馏水封胶，静置30分钟。之后，缓慢均匀地加入浓缩胶，直至加满，再加上梳子，等待20分钟后分离胶凝固。电泳槽中加入电泳缓冲液，使两块玻璃内侧电泳液高于上样孔，外侧电泳槽内电泳液浸没凝胶底部，玻璃板内侧液面高于外侧。开始上样，每孔总上样量在20 以内，上样时间要短，避免样品扩散。转膜 𐟔„ 转膜摆放顺序为：阴极碳板+海绵+三层滤纸+胶+膜+三层滤纸+海绵+阳极碳板。将电泳完毕的凝胶取出，放入转膜缓冲液中。采用“三明治”模式，打开电转印夹，每侧垫上一块专用的转膜液浸透过的海绵垫，再各放一块滤纸，凝胶平稳地放在阴极滤纸上。接着，将已经用甲醇激活过的PVDF膜放在凝胶的上方，去除气泡，夹好夹子，将转印夹放入转印槽中。封闭与抗体孵育 𐟧ꊥ𐆨𝬥𐥮Œ的膜放入装有PBST的孵育槽中，快速漂洗一次，然后加入脱脂牛奶，放置脱色摇床上，室温下封闭60分钟。按照抗体说明书，进行一抗稀释，配置好后，倒掉孵育槽中的封闭液，加入配置好的一抗，4℃孵育摇床过夜（摇床慢摇）。回收一抗，用PBST快速洗膜三次，然后加入PBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次10分钟，洗三次。将二抗用PBST按照1:5000的比例进行稀释，然后加入孵育槽中，放置摇床上慢摇，室温下孵育60分钟。 PBST快速洗膜三次，然后再加入PBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次10分钟，洗三次。曝光 𐟓𘊦 𙦍᥸榷𑦵…调整曝光时间。通过以上步骤，你就能完成一次完整的WB实验啦！希望这篇攻略能帮到你。

WB实验常见问题及解决方法汇总 𐟔젩…胶阶段常见问题漏胶：可能是玻璃板没对齐或底部缺损，厚玻璃板边条密闭性不良，塑料夹子太松。确保玻璃板干燥，用食指和拇指按压玻璃板，同时锁定锁扣。胶未凝固：APS或TEMED失效，或胶在未完全凝固时被移动。确认试剂有效性和配比，混合均匀。如果仍未凝固，增加凝固剂用量或延长时间。胶中有气泡：底部气泡可能是胶垫材质或梳子插入不当，考虑改用实心软胶垫或添加保鲜膜。梳子下缘气泡，先插一侧再插另一侧。拔梳子后泳道有胶丝：TEMED用量过多，导致胶凝固过快。减少TEMED用量。拔梳子后泳道歪斜：梳子与玻璃板不匹配。灌胶前先测试梳子。 𐟔砧”𕦳𓩘𖦮𕥸𘨧问题电泳带扭曲或歪斜：电泳槽内电泳液未完全加满或漏液。及时补充电泳液，逐渐纠正条带走向。拖尾现象：样本未能充分溶解。确保样本溶解均匀后再上样。电泳带向两侧扩散：上样量过多。适当减少上样量。底部的溴酚蓝呈现笑脸状：制胶试剂温度过高或制完胶后未及时保湿，导致胶层不均匀。降低电压并调节电泳速度，确保在冰浴条件下进行电泳。条带不整齐：胶凝固不均匀，胶下边缘有气泡，上样buffer浓度不正确，拔梳子时操作不当。确保胶完全凝固后再上样，检查并清除胶底部气泡，重新配置适合的上样buffer，水平缓慢拔出梳子。条带过粗：上样量过大，浓缩胶未浓缩好，浓缩胶pH值不正确，电压过高。减少上样量，增加浓缩胶长度，保证浓缩胶pH正确（6.8），降低电压。

Western Blot实验步骤全解析 𐟌Ÿ 样品准备（冰盒）裂解细胞：去除培养基，加入预冷的1㗐BS，轻轻摇动1分钟，洗3次。按照6孔板每孔100加入裂解液（配方：磷酸酶抑制剂1、磷酸酶抑制剂2、1㗐BS、2㗓ample Buffer，比例为1:100），置于冰上摇动裂解30分钟。迅速刮下细胞并转移至1.5ml离心管中。全程宜在冰上操作。裂解组织：配置组织裂解液（PMSF、RIPA裂解液，比例为1:100）。加入200裂解液和2颗金属磁珠，预冷研磨机进行研磨。研磨后的组织瞬离并静置于冰上继续裂解30分钟。 12000rpm，4℃离心10分钟，收集上清即蛋白样本，置于冰上。蛋白变性：样品加2㗌oading Buffer（比例为1:1），用沸水浴或金属浴100℃加热10分钟，开盖后振荡一次，继续加热5分钟。冷却后瞬离并震荡。保存：直接上样跑胶或分装-80℃长期保存。 𐟌Ÿ 电泳清洗玻璃板，自然晾干，组装电泳槽，卡紧不漏水。按配方制备分离胶，加入纯水静置到胶凝固，倒掉纯水并用滤纸吸干多余水分。按配方制备浓缩胶，避免气泡。插入梳子（浓缩胶后立即插梳子），可以立即使用或在4℃湿润条件下保存一周。组装电泳装置，加入1㗧”𕦳𓧼“冲液，双手拔出梳子。上样：Marker孔中加入2-3ul Marker，并加入1㗌oading Buffer配平（Marker孔总体积与Sample孔差值不超过5ul）。电泳：开始为恒压60-80V，当Marker开始分离后，将电压加大到恒压90-130V。 𐟌Ÿ 转膜切胶。膜和转膜装置浸入转移缓冲液中。制备“夹心饼”（全程在转膜缓冲液中进行）：从负极到正极，黑色板-海绵垫-滤纸-SDS-PAGE胶-NC膜-滤纸-海绵垫-白色板，胶和膜间不能有气泡，对齐。转膜：NC膜接正极，凝胶接负极；恒流230mA，90分钟，冰盒转膜。丽春红染色（可不做）。 𐟌Ÿ 膜封闭及抗体孵育裁膜。 5% BSA封闭（可不做）。加入一抗稀释缓冲液，4℃摇床孵育过夜。 TBST洗膜，摇动洗膜5次，每次5分钟。加入二抗稀释缓冲液，室温平缓摇动孵育1小时。 TBST洗膜，摇动洗膜3次，每次5分钟。 𐟌Ÿ 扫膜

电泳仪e9 今天在做电泳实验时，不幸拿错了电泳槽夹子。原本应该使用带有金属正负极的夹子，却误用了没有正负极的夹子。上样后才发现这个问题，情急之下，把另一个带有正负极的空夹子（没有玻璃板）也放进了电泳槽。结果发现，电流开始跑了，但电流值异常大，达到了300多毫安（正常应为30毫安左右）。这样大的电流能否让电泳顺利进行并得到可靠的结果呢？𐟤”𐟔 希望有经验的朋友能分享一下，这种情况下电泳是否还能顺利进行，并得到准确的结果。𐟙𐟓ˆ

𐟔젦ŽŒ握WB实验技巧！全流程操作指南𐟓– 1️⃣ 培养细胞或处理药物：首先，进行细胞培养或药物处理，为后续实验做好准备。 2️⃣ 清洗细胞：弃去培养基，用1X PBS溶液轻轻漂洗细胞两次，确保去除残留的培养基。 3️⃣ 提取蛋白质：加入1X SDS样品缓冲液，用刮刀刮落细胞，并将混合物转移到Ep管中。注意在冰上进行操作。 4️⃣ 剪切DNA：使用超声处理10~15秒，以降低样品的粘性。 5️⃣ 煮沸样品：将样品煮沸5分钟，以进一步处理。 6️⃣ 离心处理：以12000g离心5分钟，取上清液备用。 𐟓Š SDS-PAGE电泳：清洗玻璃板：将玻璃板对齐并放入夹中卡紧，准备灌胶。配制分离胶：制备10%的分离胶，加入TEMED后摇匀，用10ml枪吸取5ml沿玻璃板边缘注入，待胶面升到绿带中间线高度时停止，再加一层水进行液封。等待胶凝固：当水和胶之间出现折射线时，说明胶已凝固，再等3分钟使其充分凝固，然后倒去上层水并用吸水纸吸干。配制浓缩胶：制备4%的浓缩胶，加入TEMED后摇匀，将剩余空间灌满浓缩胶，插入梳子待其凝固后拔出。电泳准备：用水冲洗浓缩胶，将其放入电泳槽中，加入1X Tris-甘氨酸或SDS电泳缓冲液，准备上样。电泳过程：连接电泳槽到电泳仪，上槽接负极，下槽接正极，起始电压70~80V，10分钟后改为100V，电泳2小时或当溴酚蓝迁移至离底部1cm时停止电泳。 𐟔„ 转移蛋白：平衡胶和膜：将胶浸于转移缓冲液中平衡10分钟。若检测小分子蛋白，可省略此步。准备转移三明治：依据胶的大小剪取膜和滤纸6片，放入转移缓冲液中平衡10分钟。如用PVDF膜，需用纯甲醇浸泡5秒钟。装配转移三明治：按顺序放置海绵、3层滤纸、胶、膜、3层滤纸、海绵，每层放好后用试管赶去气泡。注意胶放于负极面。进行转移：将转移槽置于冰浴中，放入三明治，加转移缓冲液，插上电极进行1小时的转移（电流约为0.3A）。 𐟔젥𐁩—�Ž杂交：洗膜：用25ml TBS洗膜5分钟，室温摇动。封闭：将膜置于25ml封闭缓冲液中1小时，室温摇动。洗涤：用15ml TBS/T洗膜3次（5分钟/次）。一抗孵育：加入合适稀释度的一抗，室温孵育1-2小时或4Ⰳ过夜缓慢摇动。洗涤：用15ml TBS/T洗膜3次（5分钟/次）。二抗孵育：加入合适稀释度的碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗，室温孵育1小时，缓慢摇动。洗涤：用15ml TBS/T洗膜3次（5分钟/次），再用15ml TBS洗1次。显色：将A、B发光液按比例稀释混合，膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于A、B混合液滴上熄灯至可见淡绿色荧光条带（约5分钟）后滤纸贴角吸干置于保鲜膜内固定于片盒中迅速盖上胶片关闭胶盒根据所见荧光强度曝光取出胶片立即完全浸入显影液中1～2分钟清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影清水冲净晾干标定Marker进行分析与扫描

𐟔젥‡胶电泳实验注意事项：关键步骤与技巧一、配胶注意事项 𐟧ꊥ�Š‚影响：冬季配胶时，可以将其放入37℃温箱中加速凝固。夏季配胶时，注意温度对胶的影响，灌注浓缩胶后立即插上梳子，以防上层胶凝固。梳子选择：选择合适的梳子尺寸，1 mm和1.5 mm的玻璃板要搭配相应的梳子。1.5 mm的梳子无法插入1 mm的玻璃板，而1 mm的梳子插入1.5 mm的玻璃板会导致凝胶与梳子之间有空隙，影响上样。胶浓度选择：根据目标蛋白的大小选择合适的胶浓度。80~140 kD的蛋白多用8%的胶，25~80 kD的用10%，15~40 kD的用12%，小于20 kD的用15%。保存策略：频繁进行Western Blot实验时，可以一次多配几块电泳胶及running buffer，在4℃保存，避免每次配胶的麻烦。二、上样技巧 𐟚€ 上样量调整：根据蛋白表达水平调整上样量，确保每孔上样量一致。 Buffer匹配：上样时务必注意不要配错buffer，任何成分或浓度的错误都会导致跑胶异常，浪费样本。电泳槽维护：上完样后，记得加满running buffer。如果buffer加不满，可能导致不通电，蛋白跑到一半就会停住不动。梳子拔取：上层胶凝固后，可以将胶泡在running buffer里，避免暴力拔梳子，以免导致凝胶破损甚至玻璃板破裂。 Marker放置：Marker尽量不要放在中间，而是放在两边作为顺序的标记。转膜准备：电泳跑胶后如不能立即转膜，避免将胶块长时间放在running buffer里，而应该放在transfer buffer里固定（含有甲醛，可固定蛋白）。在没有电流的作用下，胶块内蛋白未被固定，会发生扩散，转完膜后信号条带难看。

𐟔젧”𕦳𓦝᤻𖥯𙗂条带形状的影响解析 𐟚€ 大家好，我是盛夏学姐，今天我们来聊聊影响WB条带形状的电泳条件。结合大家在实验中遇到的翻车条带和我的经验，总结出以下几个关键因素： ⚠️⚠️ 1. 胶的配制 2. 电泳条件 3. 转膜细节 ⚠️⚠️ 详细讲解知识点： 1⃣️. 胶的配制：配胶不均匀：很多同学反映，尽管多次涡旋、吹打、摇晃，但条带还是出现“波浪形”变化，电泳时loading“深浅不一”。解决方案：使用移液枪时，用枪头枪尖部分在玻璃板上缘左右滑动着添加，避免仅在某一角度加入导致浓度不均。配胶时间不够：loading在电泳时会呈“山字形”残留、loading互渗等。解决方案：延长制胶时间，新手建议按照说明添加促凝剂后，凝固时间至少30分钟，或者多加一些促凝剂。配胶后保存时间：部分同学配好后放在电泳液里2周还能跑，有的同学第二天就不行。建议配完胶放入电泳液前，在玻璃板下缘用保鲜膜缠绕一下或者直接现用。 2⃣️. 电泳条件：电压设置：有人建议先10v跑多少分钟、30v多少分钟，说法众多且没有定论。以下是我的电泳条件和建议：自配胶/预制胶：上层胶80-100v跑即可，结束标志为上下层胶的分界线；下层胶100-120v跑即可，结束标志为电泳槽架下缘绿色胶条处。快速电泳胶+特定电泳液：很多同学为了赶时间将电压调大，导致温度升高，进而影响转膜后发光结果。建议增加上样量和蛋白浓度来缓解降解情况。 3⃣️. 转膜细节：自配转膜液：100v，加冰恒v湿转，多少kd转多少分钟。雅酶快速转膜颗粒：400ma，30分钟室温转，限于150kd以下的蛋白，150kd以上增加5-15分钟转膜时间。转膜PVDF膜：0.45um，10-150甚至是180kd分子都可以用0.45um；10kd以下可以使用0.22um的PVDF膜。希望这些建议能帮助大家在WB实验中取得更好的结果！𐟒ꀀ

wb显影整张膜都是黑的在实验过程中，制胶是关键的一步。首先，确保玻璃片彻底清洗干净，并用纯水润洗后烘干。注意，不要用手直接接触灌胶的地方，因为手套上可能有灰尘和指纹。在配置下层胶时，要按比例混合，但记得要放置一段时间，让胶完全凝固。如果室温较低，可以增加APS的量。压胶时，使用纯水快速加入上层胶，然后插入梳子。梳子要提前准备好。电泳液和电转液要按比例现配现用。电泳液在放电泳槽外侧，内侧使用新的电泳液。转膜液也建议使用新的，最多使用两次后加入无水甲醇。不同分子量的蛋白需要不同的电转时间，记得分子量越大，转膜时间越长。转膜时，确保胶与PVDF膜之间没有气泡，这是蛋白印迹完整的关键。封闭可以选择威奥的封闭液或脱脂牛奶。最后，洗膜时要充分彻底，否则膜背景会发黑。如果发现黑点，可能是封闭液没有完全溶解或没有洗干净。保持耐心，认真完成每一步，就能轻松搞定WB实验！

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