无菌玻璃珠前沿信息_无菌技术视频(2024年11月实时热点)
食品菌落总数检测:10个关键步骤详解 食品检测员们,今天我们来聊聊如何通过实验步骤来检测食品中的菌落总数。这个过程虽然有点繁琐,但非常必要,毕竟食品安全可是头等大事! 样品稀释:固体和半固体篇 𐊩斥 ,我们要对样品进行稀释。对于固体和半固体样品,取25克样品放入一个盛有225毫升磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯中。然后,以8000到10000转/分钟的速度均质1到2分钟。如果你更喜欢拍打式均质器,那就拍打1到2分钟,制成1:10的样品匀液。 液体样品篇 犥﹤𝓦 𗥓,用无菌吸管吸取25毫升样品,放入一个盛有225毫升磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中。瓶内预置一些无菌玻璃珠,然后充分混匀,制成1:10的样品匀液。 制作10倍系列稀释液 슦夸来,用1毫升无菌吸管或微量移液器吸取1:10的样品匀液1毫升,沿管壁缓慢注入一个盛有9毫升稀释液的无菌试管中。注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面。然后振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。 选择合适的稀释度 𗥓污染状况的估计,选择2到3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)。在进行10倍递增稀释时,吸取1毫升样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1毫升空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 倾注培养基 ꊥ5到20毫升冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46ⱱ℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。 培养过程 𑊥凝固后,将平板翻转,36ⱱ℃培养48小时Ⱳ小时。水产品则在30ⱱ℃培养72小时ⱳ小时。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4毫升),凝固后翻转平板,继续进行培养。 菌落计数 观察平板上的菌落情况,必要时用放大镜或菌落计数器进行计数。记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以落形成单位(CFU)表示。 选取合适的平板 选取菌落数在30CFU到300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板进行计数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 处理片状菌落 如果一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数。 链状生长的处理 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。 好了,这就是食品菌落总数检测的全部步骤啦!希望对大家有所帮助。食品安全无小事,大家一起努力吧!
抑菌圈法:如何测试杀菌防霉剂的效果? 抑菌圈法是一种评估杀菌防霉剂效果的方法,主要用于测试其对细菌、霉菌和酵母菌的抑菌作用。这种方法是定性或半定量的,通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的品种。 ꠧ襅𗥒材料 霉菌培养皿 无菌吸管(或针筒) 圆片滤纸(直径2cm) 带玻璃珠的无菌水 带过滤漏斗的三角牌 镊子 接种针(环) 熔化状态的琼脂培养基(最好保温于45℃左右水浴中) 一定浓度的药剂 供试验用的菌种 젨ꌨ🇧苊用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中,用手振荡数分钟使孢子分散,过滤后制成混合孢子悬液。 用无菌吸管(或针筒)向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。 向各培养皿内注入15ml~20ml的熔化状琼脂培养基(约45℃),将菌液与培养基混合均匀,待其冷却。 用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻,取出置于带菌培养基平板的中央,盖上盖子。 置适宜温度下,培养2~3d,观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。 注意事项 所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理,操作必须在无菌室(或无菌箱)内于火焰旁进行。 霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液,即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液,并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。 混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL。 倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高(一般为45℃左右),否则会引起微生物死亡。也不能太低,因为琼脂会很快凝结,以致搅拌不均匀,影响试验结果。 各种微生物的最适生长温度不同(例如霉菌一般为25~30℃,细菌一般为32~37℃等),恒温培养时宜分开放置。 结果评判 由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散,因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈(加入该防霉剂对供试菌有抑制效果)。抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。在一定的药剂浓度范围内,药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。
RNA提取全攻略:从准备到操作细节 在研究基因表达和调控时,从组织或细胞中分离纯化RNA至关重要。RNA的质量直接影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的结果。 ꠤ恨 Trizol是一种广泛使用的总RNA提取试剂,含有异硫氰酸胍等成分,能够迅速破碎细胞并抑制核酸酶的释放。 Trizol含有苯酚,具有毒性和刺激性,操作时需注意安全。 RNase污染主要来自操作过程中的手和空气中的尘埃,操作时需佩戴手套,并确保样品盖严。 细胞裂解必须充分且迅速。裂解不完全会降低最终得率,因为部分RNA会残留在未裂解的细胞中。裂解后,细胞应无明显颗粒状物质(除结缔组织和骨外)。操作过程中,尽量在低温下进行,以防止内源RNase降解RNA。 对于酵母和一些细菌,由于细胞壁的特殊结构,可以在Trizol中加入无RNase的玻璃珠并剧烈振荡,以充分裂解细胞。 ⏳ 预备工作 RNA酶(Rnase)是导致RNA降解的主要因素。此酶非常稳定,常规的高温高压灭菌方法和蛋白抑制剂不能使其完全失活。 RNase广泛存在于人的皮肤上,因此制备RNA时必须戴手套。 取液器也是RNase的一个重要污染源。根据取液器制造商的要求进行处理,通常采用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部。 塑料制品、玻璃和金属物品的处理: 塑料制品:尽量使用一次性无菌塑料制品。已标明RNase-free的塑料制品,如未开封使用过,通常不必再处理。处理步骤如下: 在玻璃烧杯中注入去离子水,加入DEPC使其终浓度为0.05%~0.1%(DEPC二乙基焦碳酸酯为活性很强的剧毒物,须在通风橱中小心使用)。 将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通风柜中37℃或室温下处理过夜。 将DEPC-H2O小心倒入废液瓶中,将装有DEPC-H2O处理过的塑料制品的容器以铝箔封口,高温高压蒸汽灭菌至少30分钟。 灭菌塑料制品烘烤干燥,置洁净处备用。 玻璃和金属物品:250℃烘烤3小时以上。 储存条件 Trizol试剂在2-8℃避光保存一年。 通过以上步骤,可以有效提取高质量的RNA,为后续的分子生物学实验提供可靠的基础。
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