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玻璃匀浆器前沿信息_玻璃匀浆器的使用方法(2024年12月实时热点)

内容来源：零配件导航所属栏目：教程更新日期：2024-11-28

玻璃匀浆器

铁死亡研究：铁离子浓度测定全攻略 𐟌Ÿ 样品准备首先，用离心管精确称重并去皮，然后加入组织块再次称重。每50mg组织加入400⵬裂解液。接着，用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器将组织破碎。匀浆后，将其置于摇床上裂解2小时，然后以12000rpm离心5分钟，取上层清液备用（记得留一份BCA测蛋白浓度校正哦～）。 𐟓 标准品稀释在每个离心管中加入110uL稀释用液（后面要用100uL，所以多配一点点备用）。然后，从3mM母液中吸取12.2uL至300uM的离心管中，混匀后吸出110uL至75uM的管内，依此类推，配置成150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM的标准品。 𐟔砦𗷦𖲁配置将缓冲液与4.5%的高锰酸钾溶液（0.225g高锰酸钾加入5ml纯水）按1:1混匀。 𐟧ꠥ𗥤𝜦𖲩…置使用1.5ml离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。 𐟕𐯸 工作液孵育将工作液混匀，60℃孵育1小时。冷却至室温后离心，将管盖与管壁上的液滴沉入管底。 𐟔젩“离子检测加入30ul铁离子检测剂混匀，室温孵育30分钟。此步可能产生络合物沉淀，用移液器轻轻吹打即可溶解，若沉淀不溶，12000rpm离心5分钟，取上层清液即可。 𐟓Š 检测取200ul于96孔板，在550nm测定吸光度（如果不能测定550nm，也可以在540nm~580nm范围内检测）。 𐟓ˆ 绘制标准曲线并计算铁离子浓度最后，绘制标准曲线并计算铁离子浓度。记得用BCA校正浓度哦～ ⚠️ 注意事项操作时尽量避免铁器的接触，所以我把塑料吸头套在了镊子上来取组织啦～

鋨銥溶液如何分离提取 𐟌Ÿ Trizol法提取RNA的原理 Trizol是一种单相溶液，由苯酚和异硫氰酸胍等组成。它能破坏细胞并溶解细胞成分。通过加入氯仿，可以萃取出上层水相（含RNA）、界面层和下层的红色有机相（含DNA和蛋白）。 𐟔젥ꌦ�ꤊ样品处理组织：将组织在液氮中研磨，每50-100mg组织中加入1mlTrizol，用匀浆仪进行匀浆处理，样品体积不应超过Trizol体积的10%。单层培养细胞：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每10cmⲩ⧧ﯼˆ即3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液枪吹打几次。裂解细胞对于贴壁细胞：吸弃培养基，用1mlPBS洗2次（PBS要避免37℃水浴，不能用冷的PBS）。在6孔板中放冰上，每孔加入1mlTrizol，裂解细胞，吹打混匀至透明。收集裂解液将裂解液收集到1.5mlEP管中，裂解5-10min。此时可存于-80℃中。每个样品中加入200ul氯仿，剧烈震荡15s，室温3min。 12000rpm离心15min。沉淀RNA 在新的EP管中加入500ul异丙醇，1:1吸取等体积的上层RNA水相溶液，同一方向混匀，室温下静止10-20min。注意不要吸到下面中间层。 12000rpm，4℃离心10min。弃除异丙醇，留下沉淀。洗涤RNA 加入1ml75%乙醇，12000rpm，4℃离心3min，弃上清液。重复上一步，室温干燥5min（RNA晾干，留一点点就可以了）。溶解RNA 加入30-50ulDEPC水溶解，用NanoDrop2000测纯度（1.8-2.1正常）。分装，于-80℃冻存。 𐟧𜠦𓨦„事项过程中需佩戴口罩和新手套，对台面以及周围环境进行灭酶处理，尽量在超净台中进行操作。使用无Rnase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。溶液配制应使用无Rnase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度为0.1%（V/V），放置过夜，高压灭菌）。 Trizol裂解液非常危险，需小心避免溅到身上，台面上的Trizol要及时清理干净。 𐟒ᠥ𘸨灩—˜ RNA得率过低：使用更有效的破碎/匀浆方法，如液氮捣碎、酶消化破壁、电动匀浆器匀浆；更换抽提试剂；核酸浓度低时，采用低温沉淀，并延长沉淀时间；增加细胞数量。 RNA质量不高：取上层水相时求多，吸到了下层有机相；清洗不干净。

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