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膜片钳实验电极制备到封接 膜片钳实验的关键在于制备合格的膜片微电极,这是成功封接细胞膜的基础。以下是详细的操作步骤: ꠧ制备 选择合适的玻璃毛细管:选用软质玻璃(如苏打玻璃、电石玻璃)或硬质玻璃(如硼硅玻璃、铝硅玻璃、石英玻璃)。软玻璃电极常用于全细胞记录,硬质玻璃电极则用于离子单通道记录。 拉制电极: 第一次拉制:将玻璃毛细管拉长至7~10mm,直径小于200um。 第二次拉制:在此基础上进行第二次拉制,使尖端直径达到1~2um。这样可以使电极前端的锥度变大,狭窄部长度缩短,从而降低串联电阻,减少全细胞记录时的电极液透析时间。 涂抹硅酮树脂:在电极前端涂上硅酮树脂(sylgard),以降低电极与灌流液之间的电容,并形成一个亲水界面。经过处理后,电容可由6~8pF减少到1pF以下。硅酮树脂对形成Giga的seals无影响,但可减少本底噪音,对单通道记录很重要。 抛光电极: 将电极固定在显微镜工作台上。 在镜下将尖端靠近加热丝,通电加热时,可见电极尖端微微回缩,此时电极变得光滑,且尖端的杂质被烧去,得到较干净的表面。这样有利于和细胞膜紧密封接,并在封接后更易保持稳定。 注电极液 在实验前要灌注电极液。由于电极尖端较细,因此在充灌前,电极内液要用0.2um的滤膜进行过滤。 灌尖:将电极尖端浸入内液中5秒,由于毛细作用溶液会进入电极最尖端处。 后充:从电极后端用细小的聚丙烯注射管插至尖端附近,将溶液充至1/4长度,用手指轻轻弹除尖端残留的气泡即可。 灌注后的电极电阻一般为2~5M全细胞记录则最好在2~3M 通过以上步骤,你可以成功制备出合格的膜片微电极,为膜片钳实验打下坚实的基础。
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